多重熒光免疫組化檢測（multiplex fluorescent immunohistochemistry，MF-IHC）是一種應用免疫學基本原理——抗原抗體反應的檢測方法。它采用TSA技術，又稱之為絡胺信號放大技術，通過多重熒光素共價偶聯的方法來檢測樣本中的多種蛋白質。這種方法利用HRP催化后續添加的熒光素，使熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯，使得蛋白樣品與熒光素穩定的結合。最后通過微波處理，前一輪非共價結合的抗體被洗掉，共價結合的熒光素還殘留在樣品上，再進行第二輪的孵育。等到所有的抗體孵育結束以后，熒光素都結合好以后，最后對結果進行檢測。由于每一體系中都只有單一抗體孵育，因此無需要擔心抗體的交叉反應以及一抗二抗種屬匹配的問題，大大減少了實驗設計時不同種屬抗體選擇匹配的限制。
作用：
多重熒光免疫組化檢測在醫學和生命科學領域中有著廣泛的應用。它主要用于同時檢測多個生物分子標記物，例如蛋白質、核酸、糖類等，從而實現對細胞和組織的深入分析。例如，在腫瘤領域中可以同時檢測腫瘤細胞的多個生物標志物，如PD-L1、TMB、基因表達譜等，以全面、客觀地分析患者的腫瘤微環境，幫助臨床預測腫瘤對治療的反應，為患者節省治療時間和治療成本。此外，免疫組化檢測還能全景展示和統計腫瘤不同區域免疫微環境內各個組分的信息，有利于更加客觀的定性、定量評估各種細胞。
總的來說，多重熒光免疫組化檢測是一種強有力的工具，可以幫助我們更好地理解疾病的機制，發現新的治療靶點，提高疾病的診斷率和治療成功率。
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