抗原修復(fù)液胰酶法

在免疫組化染色后的鏡下觀察中，有發(fā)現(xiàn)這樣的結(jié)果，陽(yáng)性物反應(yīng)不強(qiáng)，時(shí)隱時(shí)現(xiàn)，表達(dá)不均勻，有時(shí)可出現(xiàn)假陰性，這是因?yàn)椋?br/>1.組織在用甲醛固定的過(guò)程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定簇。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個(gè)作用，因?yàn)樗且环N聚合固定劑，因而能在相鄰的蛋白質(zhì)鍵間形成橋鍵的作用。
2. 甲醛在保存進(jìn)程中會(huì)形成羥甲基，也可封閉抗原決定簇。據(jù)French和Edsall的研究認(rèn)為，遇到的甲醇反應(yīng)，就是加到一個(gè)含反應(yīng)性氫原子的化合物中，形成一個(gè)羥甲基化合物。
3.在組織固定過(guò)程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無(wú)法表達(dá)出來(lái)。
為了解決上述存在的問(wèn)題，更好地暴露出抗原，將其很好地顯示出來(lái)，*的方法就是必須進(jìn)行抗原修復(fù)。
至今為止，抗原修復(fù)有許多種方法，在這些方法中，有的是根據(jù)抗體的要求來(lái)進(jìn)行，有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來(lái)進(jìn)行，我們則對(duì)每種病例每項(xiàng)檢測(cè)，都要求必須進(jìn)行抗原修復(fù)，以達(dá)到抗原全面表達(dá)的狀態(tài)。

抗原修復(fù)液胰酶法使用方：

切片脫蠟水化，將100-200μl抗原修復(fù)液加至玻片上覆蓋組織，37℃ 10-15分鐘后（室溫條件下時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)），PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。隨后即可進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。

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